pcr退火溫度是根據(jù)什么原則設(shè)計的

或者為了提高特異性，可以在根據(jù)較高Tm設(shè)計的退火溫度先進(jìn)行5個循環(huán)，然后在根據(jù)較低Tm設(shè)計的退火溫度進(jìn)行剩余的循環(huán)。這使得在較為嚴(yán)緊的條件下可以獲得目的模板的部分拷貝。

在實際操作中，退火溫度通常是在實驗設(shè)計階段根據(jù)上述原則進(jìn)行初步設(shè)定。隨后，可以通過預(yù)實驗來進(jìn)一步調(diào)整退火溫度。預(yù)實驗的目的是通過觀察PCR產(chǎn)物的質(zhì)量和產(chǎn)量，來確定最優(yōu)的退火溫度。這一過程需要通過調(diào)整退火溫度，觀察PCR產(chǎn)物的出現(xiàn)情況，最終找到能夠產(chǎn)生高質(zhì)量、高產(chǎn)量產(chǎn)物的最適退火溫度。

退火溫度低于引物Tm值5 ℃左右，一般在45～55℃。退火溫度需要從多方面去決定，一般根據(jù)引物的Tm值（Tm值=4（G+C） +2（A+T）為參考，根據(jù)擴(kuò)增的長度適當(dāng)下調(diào)作為退火溫度。然后在此次實驗基礎(chǔ)上做出預(yù)估。退火溫度對PCR的特異性有較大影響。延伸時間：1min/kb（10kb內(nèi)）。